Obtención de sobrenadante de cultivo aglutinador de hematíes portadores del antígeno de grupo sanguíneo B / Obtention of cell culture supernatant for erythrocyte agglutination of blood group B antigen

Introducción: la obtención de anticuerpos monoclonales en líquido ascítico ha ido decayendo paulatinamente por la aparición de alternativas de producción in Vitro, que permiten alcanzar mayores volúmenes y un control más riguroso del proceso productivo, lo que incrementa la reproducibilidad de procesos y la calidad de los productos. Objetivo: evaluar dos métodos de producción de sobrenadante de cultivo rico en una inmunoglobulina de ratón del tipo IgG2b, aglutinadora de hematíes humanos portadores del antígeno del grupo sanguíneo B, según el sistema ABO; la cual es secretada por el hibridoma C6G4. Métodos: se evaluaron dos métodos de producción del anticuerpo con el empleo de un biorreactor CELLine, útil como modelo para la obtención de anticuerpos monoclonales en cultivos de alta densidad celular. Los métodos se diferenciaron esencialmente en la densidad celular de siembra en el biorreactor y en la duración del periodo de fermentación entre la siembra y la cosecha del caldo de cultivo rico en anticuerpos. Para cada método se determinó la concentración específica de anticuerpos y la potencia de aglutinación del sobrenadante, así como la densidad y la viabilidad celular del cultivo alcanzadas en el momento de la cosecha. Resultados: se observó que ambos métodos generaron sobrenadantes de cultivo con una potencia de aglutinación similar, a pesar de que se encontraron diferencias en el resto de las variables medidas. Si bien uno de los métodos produjo una mayor concentración de anticuerpos en el sobrenadante, no se observaron diferencias en la potencia de aglutinación de los sobrenadantes obtenidos por ambas alternativas. Conclusiones: los dos métodos estudiados permitieron obtener volúmenes semejantes de sobrenadante anti-B con diferentes concentraciones de anticuerpos, pero con una potencia de aglutinación similar. La principal diferencia residió en que uno de los métodos permitió obtener el mismo volumen del producto en un tiempo sensiblemente menor...

Introduction : the obtention of monoclonal antibodies in ascite fluid has been declining gradually due to the appearance of alternative in vitro production that achieve higher volumes and a more precise monitoring of the production process, which increases the reproducibility of processes and the quality of products. Objective : to evaluate two methods to make cell culture supernatant rich in murine monoclonal IgG2b type, with agglutinating activity against human red cell of blood group antigen B (ABO system), which is secreted by murine hybridoma C6G4. Methods : two methods were evaluated for antibody production in cell culture supernatant using as model a CELLine bioreactor for the production of monoclonal antibodies in high cell density culture. Both methods essentially differed in the seeding cell density in the bioreactor and the fermentation period between seeding and harvesting of the culture broth rich in antibodies. The specific antibody concentration and potency of agglutination was determined in the obtained supernatant and also the cell density and cell viability of the culture reached at the time of harvest. Results : both methods generated culture supernatants with similar agglutination strength despite differences found in the rest of the variables measured. Even when one of the methods produced a higher antibody concentration in the supernatants, no differences in potency of the supernatants agglutination obtained by both alternatives were observed. Conclusions : both methods generated supernatant anti-B with different concentrations of antibodies but similar potency of agglutination. The main difference was that with one of the methods the same volume of the product was obtained in a considerably minor time...

Avaliação de diferentes vias vacinais para vacinação contra o vírus da doença de Newcastle em aves de fundo de quintal / Assessment of different vaccination approaches against Newcastle disease virus in domestic backyard poultry

Foram avaliadas três vias de aplicação vacinal contra o vírus da doença de Newcastle em aves de criatório de fundo de quintal (AFQ) jovens e adultas. Um total de 135 AFQ foram distribuídas em tratamentos distintos de acordo com a via vacinal: via ocular (VO), água de bebida (VAB) e alimentar (VA). Cada tratamento foi representado por 40 aves (20 jovens e 20 adultas) e utilizou-se um grupo-controle de 15 aves não vacinadas. O programa de vacinação estabelecido constou de uma primovacinação e dois reforços vacinais, utilizando-se a cepa La Sota. Para aves jovens, os títulos obtidos pelas VO e VAB não diferiram aos 15, 45 e 140 dias, mas houve diferenças nos títulos das aves vacinadas pela VA. Nas aves adultas, a vacinação pela VO apresentou resultados mais elevados que as vacinações pelas VAB e VA na primeira resposta, aos 15 dias. Aos 45 dias, os títulos obtidos pela VAB foram mais baixos que os obtidos pela VO, e, aos 140 dias, não houve diferença entre as três vias avaliadas. Concluiu-se que as vacinações pelas VO e VAB constituem alternativas eficazes para vacinação de AFQ jovens e adultas.

Three ways of vaccination against Newcastle Disease Virus (NDV) were evaluated in young and adults domestic backyard poultry (DBP). A total of 135 DBP was submitted to three different administration routes of ND vaccine: eye-drop, drinking water, and feed. Each treatment consisted of 40 birds (20 young and 20 adult) and a control group of 15 unvaccinated birds. The treatment consisted of a first vaccination and two boosters, using La Sota strain. For young birds, the eye-drop and drinking water vaccinations presented no differences at 15, 45, and 140 days, differing from the titers obtained by birds treated by feed vaccination method. In the adult birds, the eye-drop administration presented higher titers than by drinking water and feed approaches in the first response to the vaccination at 15 days. At 45 days, the results obtained by the drinking water had lower titers than those from the eye-drop. The three vaccination methods presented no difference at 140 days. In conclusion, the vaccination by eye-drop and drinking water methods constituted an efficient alternative of vaccination for adult and young DBP against Newcastle virus.

Gametocitos de Plasmodium vivax y Plasmodium falciparum: etapas relegadas en el desarrollo de vacunas / Plasmodium vivax and Plasmodium falciparum gametocyte stages are neglected in vaccine development

Los gametocitos de Plasmodium son los responsables de la transmisión del huésped vertebrado al mosquito vector. Sufren un proceso de desarrollo complejo a partir de parásitos asexuales, que no está completamente entendido, expresando proteínas y moléculas de adhesión específicas. Son capaces de inducir una respuesta inmune humoral específica con anticuerpos IgG, y celular específica, con producción de TNFa, IFNg y proliferación de linfocitos gd+, aun cuando existen respuestas inducidas en contra de las etapas previas del parásito (esporozoito, exo-eritrocítica y eritrocítica). Las vacunas destinadas a bloquear la transmisión del parásito no contemplan a los gametocitos circulantes en el huésped como blancos de acción, sino que van enfocadas contra antígenos expresados en los gametos y en las etapas posfertilización. El estudio de los mecanismos que regulan la producción de gametocitos y de la respuesta inmune contra éstos, ofrece una oportunidad para el desarrollo de estrategias adicionales para el control de la transmisión.

Changes of immune system in military recruits after the training program.

The aim of the exercise was to improve body health including the immune system function. However, several studies have observed the suppression of immune response in athletes who were trained with strenuous exercise. Recruits who have been in the recruitment-training program for 8 weeks might also have immune suppression. Twenty males, aged from 21 to 23 years in Chulachomklao Royal Military Academy infantry battalion volunteered to participate in this study. They were asked to wear a Polar Accurex Plus Telemetric heart rate monitor during the training period. Tuberculin skin test which is the screening method for cellular immune responses was significantly decreased at post-training compared to the pre-training (p<0.02). The levels of serum IgG and IgM at pre-training, 4th week, 8th week and one week post-training were significantly decreased at the initiation period, which were compared with pre-training and 4th week of training (p<0.01), and returned to normal at the 8th week of training and one week post-training. The level of circulating immune cells and number of CD markers (CD3, CD4, CD8, and CD56) were not significantly changed throughout the training period. This study demonstrated that subjects who underwent the recruit-training program were able to improve their health after the period of training i.e., in the adaptation period. The decrease in the initiation period could be compensated with proper diet and enough rest.

Resposta imunológica em pacientes hospitalizados por tempo prolongado / Immunological response in long term patients

O objetivo deste trabalho foi a avaliação da resposta imunológica em pacientes hospitalizados por mais de 30 dias. Analisou-se o sangue periférico de 50 indivíduos - 25 hospitalizados por mais de 30 dias, imobilizados por fraturas, sem necessidade de procedimentos cirúrgicos e 25 sadios. Realizou-se: contagem de linfócitos totais, linfócitos T e B, fagocitose de partículas de zymosan por monócitos, teste do NBT, dosagens de imunoglobulinas séricas e dosagens de C3 e C4. O principal resultado encontrado foi a diminuição do teste do notroblue tetrazolium em pacientes hospitalizados, indicando uma redução na etapa da digestão da fagocitose por polimorfonucleares neutrofílicos. Provavelmente as alterações encontradas predisponham estes pacientes à infecção hospitalar, cuja agente mais freqüente é o Staphylococcus aureus

Humoral immune responses in different clinical forms of tuberculosis.

To assess the antibody responses in different clinical forms of tuberculosis in an attempt to ascertain the specificity of such a response, so that it may be used as a diagnostic tool, 93 tuberculosis cases and 62 normal healthy controls were included in the study. All the cases were diagnosed as tuberculosis by clinical picture including radiological findings, blood picture, fine needle aspiration cytology (FNAC) or histopathological features, sputum examination or urine culture for acid-fast bacilli. IgM and IgG antibodies in the cases and controls were detected by ELISA using A60 antigen from M. bovis and compared with common diagnostic parameters of tuberculosis like presence of acid-fast bacilli in smear and tuberculin response. Antibody responses with A60 antigen has not been found to be specific and often failed to detect a new case.

Los microbios y el hombre, ¿enemigos o amigos? / Microorganisms and man: enemies or friends?

Todos los microorganismos (bacterias, parásitos, hongos y virus) han constituido desde siempre un panel de agresores para el hombre, siendo responsables directos o indirectos de múltiples patologías de origen infeccioso que se desarrollan enfrentando a los mecanismos de la inmunidad. El presente artículo se divide en dos partes: la primera constituye una resumida actualización de los eventos inmunes y la segunda una discusión de la relación microbios-hombre en términos evolutivos replanteando desde esa óptica el clásico antagonismo. En ese sentido, un dinámico equilibrio entre ambos, puede ser alternativamente alterado por uno de los responsables con una consecuente compensación a cargo de la contraparte. Así, tomando como referencia el permanente cambio en las estrategias de evasión microbiana, puede especularse que los mecanismos inespecíficos junto a las barreras naturales pueden haber sido la defensa ancestral del hombre. Más adelante la inflamación inicial puede haber sido mejorada mediante la generación de moléculas activadoras del complemento. Posteriormente, las moléculas de histocompatibilidad y los receptores antigénicos de los linfocitos B y de los linfocitos T pueden haber sido generadas para montar los eventos específicos que hoy se conocen. La participación de células fundamentales y accesorias en forma conjunta ha hecho necesaria la expresión de moléculas de adhesión y la generación y ampliación del espectro de citoquinas y sus receptores. La producción de anticuerpos puede haber inducido el mejoramiento efector de sistemas moleculares como el complemento y así juntos, eficientizar la primitiva fagocitosis. La evolución del linaje T puede haber sido más compleja, habida cuenta que debieron generarse subpoblaciones o sets citotóxicos por un lado y orquestadores y reguladores por otro. Por otra parte la diversidad de reconocimiento que se hizo necesaria a nivel de los receptores específicos se desarrolló con un gasto mínimo de información genética, pero posibilitó la aparición de fenómenos no deseados con participación de efectores inmunes, lo que impuso la aparición de críticos mecanismos reguladores donde participan sinérgicamente todos los sistemas biológicos...

Prevención de la isoinmunización materna al RhD, con gamma-globulina anti-D / Prevention of maternal RhD isoimmunization with anti-D gamma globulin

Objetivo. Presentar la experiencia institucional en la prevención de la isoinmunización al RhD, mediante el empleo de 150 µg de g-globulina anti-D en las mujeres Rh negativo. Material y métodos. Se registraron los antecedentes inmunohematológicos de los casos consecutivos de todas las mujeres Rh negativo que acudieron, para su atención médica, al Instituto Nacional de Perinatología entre 1982 y 1995. A las mujeres con riesgo de isoinmunización se les aplicó 150 µg de g-globulina anti-D, con fines preventivos. Resultados. En el periodo de estudio ingresaron 4 857 mujeres Rh ne-gativo (4.85 por ciento del total de mujeres), de las cuales 629 (13.0 por ciento), presentaron isoinmunización al RhD. De estas últimas, 542 (86.2 por ciento) ya se encontraron isoinmu-nizadas desde antes de su ingreso al Instituto. En 22 casos (3.5 por ciento), la isoinmunización ocurrió a pesar de que recibie-ron la dosis adecuada de g-globulina anti D. De las 2 605 pacientes (53.6 por ciento) sometidas a prevención, a 2 039 se les aplicó una sola dosis, y a 475, hasta dos dosis. En 22 casos se documentó la falla de la prevención; sin embargo, en cua-tro de ellos, se registraron embarazos múltiples, y los restantes 18 presentaron patología obstétrica asociada. Conclusiones. Mediante este programa de prevención, consistente en administrar 150 µg de g-globulina anti-D por dosis, es posible reducir la iso-inmunización a menos de un caso por cada 1 000 mujeres. Los fracasos en la prevención de la isoinmunización se asociaron a condiciones obstétricas agregadas y al incumplimiento de las guías o lineamientos del programa. El texto completo en inglés de este artículo está disponible en: http://www.insp.mx/salud/index.html

Tratamento neonatal com agonista 5-HTÿ1a Altera imunidade humoral no adulto / Neonatal treatment whit 5-htÿ1a agonist alters humoral immunity in adult

Há poucas evidências sobre o envolvimento do sistema serotoninergico na antogenese do sistema imune. Em ratos , o período de aleitamento corresponde ao periodo crítico de desenvolvimento do SNC, fase vulnerável à agressões farmacológicas. As repercussões da manipulação do sistema serotoinérgico, neste período, sobre parâmetros imunológicos são também pouco estudadas. No presente estudo, foi avaliado aspectos da resposta imune em ratos adultos tratados, ou não, no período de aleitamento, do 1§ ao 21§ dia pós-natal, com Buspirona 5mg/Kgs.c, agonista do receptor 5HT 1A. Aos 90 dias de vida, foram colhidas 2 amostras de sangue, de cada animal, para contagem total e diferencial de leucócitos e obtenção do soro, respectivamente. Em seguida, os animais foram imunizados com hemácias de carneiro. Ainda foram coletadas amostras 7 e 15 dias após para obtenção do título de anticorpos anti-hemácia de carneiro. No 15§ dia de imunização, os animais foram sacrificados para retirada de orgãos (cérebro, timo e baço) e posterior obtenção dos pesos. O tratamento neonatal com buspirona reduz a resposta imune humoral em ratos na idade adulta e modificação do número de linfócitos e sequelas no cérebro e timo. Manipulaçao do sistema serotoninérgico feita no período crítico de desenvolvimento do SNC parece estar envolvida nessa alteração

Modelo experimental para avaliaçäo da resposta imune em ovinos / Experimental model for immune response evaluation in sheep

O presente trabalho procurou analisar uma metodologia de avaliação da resposta imune em ovinos mantidos em condições experimentais. Foram empregados cinqüenta ovinos adultos divididos em cinco grupos experimentais. Os animais foram tratados com levamisol (grupo I), parapoxvirus (Grupo II) e dexametasona (grupo III). Os grupos IV e V foram usados com controle. A resposta imune celular foi analisada pelo teste da tuberculina após sensibilização prévia pelo BCG. A resposta imune humoral foi analisada pelo teste de soroaglutinação em placa após a sensibilização pela vacina contra a brucelose. A sensibilização prévia de ovinos com BCG e com a vacina contra a brucelose pôde ser posteriormente comprovada, todavia, não foi possível demonstrar diferenças nestas respostas em animais tratados com levamisol, parapoxvirus e dexametasona.

Regional specificity seen within hypothalamus in neuroimmunomodulation.

Wistar strain male albino rats lesioned and sham lesioned at Ventromedial hypothalamus (VMH) were used to study the neuroimmunomodulation by this brain region. Except the decrease in thymus weight/body weight ratio (P < 0.01), and its cellularity (P < 0.02) in immunized VMH lesion animals, the rest of the parameters like plaque forming cells (PFC), antibody titre, leukocyte migration inhibition index, foot pad thickness in the lesioned as well as the lesion immunized animals never deviated from their respective sham and immunized sham animals. Sham operated belongs to VMH when compared to control rats, showed marked decrease in spleen weight (P < 0.001), thymus weight (P < 0.02) and decrease in popliteal lymph node weight (P < 0.001) ratios. After immunization, the immunized sham animals showed a marked decrease in antibody titre (P < 0.05), PFC (P < 0.05), spleen (P < 0.05) and thymus (P < 0.001) weight ratios with the significant increase in splenic cell count (P < 0.01) compared to immunized control rats. VMH may be one of the information receiving center. However, from these results, it is inferred that VMH could not be a modulating center for the many of the parameters studied as far as neuroimmunomodulation is concerned.

Humoral and cellular immune response within the subarachnoid space of patients with neurocysticercosis

To study the immune response within the subarachnoid space in patients with neurocysticercosis, we measured the cerebrospinal fluid contents of immunoglobulins A, E, G, and M in 38 patients and the contents of the proinflammatory cytokines TNF-alpha, IL-1b, IL-6 and IFN-gamma in 17 patients. The same measurements were made in 30 neurological patients without inflammatory or immune-mediated disorders. Each immunoglobulin and cytokine, including the gender and age of the patient, was compared by multiple regression analysis with the CSF contents of cells, protein and ELISA for cysticercal antigens. A direct correlation was found of IgM with cell content (p<0.058) and with ELISA values (p<0.027); of age with protein content (p<0.006); of IL-6 with protein content (p<0.018) and of IL-1b with ELISA values (p<0.004). An inverse correlation was found of glucose with ELISA values (p<0.008). A complex function of the immune response within the subarachonid space was observed: mean values of IgG, IgM, IgE and interleukins 1b and 6 were increased, whereas values of IgA, TNF-alpha and IFN-gamma were similar to those of controls